趙紅艷 濱州醫學院

　　于敦洋 濰坊市農業局

　　摘要：展青霉素作為一種真菌毒素，在腐敗霉爛的水果中經常存在。當前展青霉素的檢測方法主要是薄層色譜和液相色譜法，這兩種方法特異性差，假陽性不可避免，液相色譜-串聯質譜法由于儀器成本高，難以廣泛推廣，特異性高、簡便、靈敏、快速的免疫學方法是今后需要重點開發的一個方向。

　　關鍵詞：展青霉素 污染檢測 方法進展

　　展青霉素(Patulin)，多聚乙酰內酯類化合物，其化學名稱為4-羥基-4氫-呋喃-[3,2c]-吡喃-2(6)-酮[1],化學式C7H6O4,分子量154。

　　展青霉素在酸性環境中非常穩定，在堿性條件下活性降低。展青霉素最先在霉爛蘋果和蘋果汁中發現，并廣泛存在于各種霉變水果中。許多青霉能產生展青霉素，包括展青霉、棒型青霉等共3屬16種，這種毒素具有影響生育、致癌和免疫等毒理作用。同時，該青素也是一種神經毒素，可能使人神經麻痹、肺水腫、腎功能衰竭[1]。

　　1 展青霉素污染現狀

　　展青霉素主要污染水果及其制品，尤其是蘋果、山楂等[1]。有研究表明，展青霉素的污染不分地域，在國內外均有發現。賀玉梅等[2]對采自北京市5個區縣7個生產廠家的109個水果制品進行了分析，其中測定的28份果醬中展青霉素自然污染的陽性率為31.3%;宋家玉等[3]對山東地區的水果中展青霉素污染情況進行了調查分析，發現新鮮水果未見污染，霉爛蘋果污染率40%，蘋果制品污染率70%，陽性樣品平均含量80.6μg/kg，山植制品污染率31.4%,平均含量51.9μg/kg;魯琳等[4]對廣東省市場銷售的蘋果、山楂制品中展青霉素殘留量的情況進行了考察，結果發現展青霉素檢出率7.2%，超標率占樣品總數的1.2%;吳南等[5]、劉勇等[6]也分別對我國不同省市的水果制品進行了考察，陽性檢測率分別為76.9%和73.3%，以上結果說明我國水果及其制品展青霉素污染情況比較普遍。

　　鑒于展青霉素潛在的毒性及危害性，我國對展青霉素的限量也作了規定，GB 2761-2011《食品安全國家標準食品中真菌毒素限量》規定以蘋果及山楂為原料制成的產品中(果丹皮除外)展青霉素限量為50μg/kg。

　　2 檢測方法現狀

　　2.1 薄層色譜法

　　薄層色譜法是最早應用于展青霉素檢測的方法，具有設備簡單、經濟的特點，為展青霉素的廣泛檢測發揮了重要作用。Silvana等[7]建立了一種快速薄層色譜法檢測蘋果制品中展青霉素的方法，可同時檢測10個樣品。方法檢測限分別為20ng/g和12ng/g，平均回收率為78%，適用于展青霉素含量50～150μg/kg的樣品測定。劉勇等[8]利用1.5%碳酸鈉凈化樣品、經雙向薄層分離后,利用CS-910薄層掃描儀進行紫外反射光掃描定量。方法平均回收率為90%～104%，展青霉素最低檢出量為2ng。

　　但是薄層色譜法在實際檢驗過程中操作繁瑣，重復性差，在有酚類物質存在的條件下，有可能出現假陽性，需進行確證性試驗。

　　2.2液相色譜法

　　隨著檢驗設備的發展，高效、快速、準確的液相色譜儀也越來越多地應用于展青霉素的檢測。鄧鳴等[9]采用1%醋酸溶液提取，經分子印跡固相萃取柱凈化，以乙腈-水作為流動相，C18色譜柱分離，紫外檢測波長為276nm。結果展青霉素在4.83～96.59ng/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系，相關系數為0.9999,方法檢測限為3μg/kg,回收率在72.9%～86.0%。

　　高效液相色譜法最主要的就是展青霉素與羥甲基糠醛的分離。方法一般都用大量有機溶劑提取，以碳酸鈉凈化，但在此條件下展青霉素容易被破壞，回收率降低，而且由于液相色譜法中紫外檢測器的局限性，假陽性的情況不可避免會發生。因此液相色譜-質譜聯用技術(HPLC-MS/MS)越來越多地被應用于展青霉素的檢驗和確證試驗。

　　牛華等[10]建立了超高效液相色譜-電噴霧串聯三重四極桿質譜(UPLC-ESI-MS/MS)聯用技術分析果汁中展青霉素的方法。濃縮果汁樣品經酶解,乙酸乙酯提取，固相萃取(SPE)小柱凈化后，以水和乙腈作為流動相進行梯度洗脫，電噴霧離子源負離子多反應監測模式質譜進行分析。展青霉素在1.0～500.0μg/L范圍內線性關系良好，定量限為5.0μg/kg;加標回收率為80.6%～91.8%。液相色譜串聯質譜儀能夠確證展青霉素，但是設備價格高，難以廣泛推廣。

　　2.3 免疫學檢測方法

　　免疫學方法以其特異性、高通量、快速簡便等優點，在檢測領域發展迅速，應用前景非常廣闊。目前，展青霉素的主流檢測方法還是色譜法，但是其免疫學方法也不斷被開發、完善。1993年Mcelroy等人[11]首次提出了展青霉素的間接酶聯免疫(ELISA)檢測方法。從而實現了對展青霉素的快速特異性檢測。Wang等人[12]指出免疫技術抗原制備繁瑣、檢測成本高，而且由于抗原分子小，容易受到基質影響，假陽性也難免存在。由于免疫學技術的高特異性，很多成品試劑盒也被開發出來，并被應用于實驗室快速檢測。免疫學技術作為一種新興技術，由于其簡便、靈敏、檢測快速等優點，仍然有巨大的發展前景，是未來展青霉素檢測的發展方向。

　　3 展望

　　當前，食品安全問題日益受到社會關注，食品安全問題時有發生，因此，檢驗技術的提高需求日益迫切。當前展青霉素的檢測方法主要是薄層色譜和液相色譜法，這兩種方法特異性差，假陽性不可避免，液相色譜-串聯質譜法由于儀器成本高，難以廣泛推廣，特異性高、簡便、靈敏、快速的免疫學方法是今后需要重點開發的一個方向。

　　參考文獻

　　[1] 周玉春等.展青霉素的研究進展[J].貴州農業科學，2010,38(2):112-116.

　　[2] 賀玉梅，賈珍珍.北京市部分水果制品霉菌及展青霉素的污染情況調查[J].衛生研究,1993,(3):173-176.

　　[3] 宋家玉，邢金川，林藝，吳南，王玉華.山東省部分水果及制品中展青霉素污染調查分析[J].中國食品衛生雜志,1995,(2):43-44.

　　[4] 魯琳，高燕紅，許秀敏，黃湘東，李暉.2005～2007年廣東省抽檢蘋果、山楂制品中展青霉素殘留量結果分析[J].中國衛生檢驗雜志,2008,18(8):1591-1604.

　　[5] 吳南，王玉華，劉勇，宋家玉，楊新民.我國部分地區水果制品中展青霉素含量的調查[J].衛生研究,1992:(03):67-68.

　　[6] 劉勇，胡文娟.我國部分地區霉爛蘋果及部分水果制品中展青霉素的測定[J].衛生研究,1991:(4):35-37.

　　[7]SilvanaVero,AlvaroVazquez,MatildeSoubes.A rapid TLC-scanning method for the determination of patulin in apple products[J].Journal of Planar Chromatography,1999,12(3):172-174.

　　[8]劉勇,胡文娟.蘋果及其制品中展青霉素的薄層掃描測定法[J].衛生研究，1988,17(4):42.

　　[9]鄧鳴，朱斌，賓春燕.分子印跡固相萃取-高效液相色譜法測定中成藥中展青霉素[J].中成藥,2014,36(10):2224-2226.

　　[10]牛華，馮雷，牛之瑞，珠娜，祝紅昆，超高效液相色譜-串聯質譜法測定果汁中的展青霉素[J].色譜,2012,30(09):957-961.

　　[11] LJ Mcelroy，CM Weiss. The production of polyclonal antibodies against the mycotoxin derivative patulin hemiglutarate[J].Canadian Journal of Microbiology,1993, 39(9):861-3.

　　[12] YingWang, NanLiu, BaoanNing, MingLiu. etal. Simultaneous and rapid detection of six different mycotoxins using an immunochip[J].Biosensors&Bioelectronics,2012,34(1):44-50.