銅綠假單胞菌也稱綠膿桿菌，是一種常見的條件致病菌。銅綠假單胞菌在自然界分布廣泛，存在于空氣、土壤、水體、動物和人皮膚、呼吸道及腸道中。銅綠假單胞菌能夠產生溶于水的綠膿菌素、熒光色素、紅膿菌素，同時該菌還能夠產生內毒素、胞外毒素、外毒素A等十余種致病因子，其中外毒素A為重要的致死因子。在食品檢測領域，銅綠假單胞菌是一種非常重要的水源性致病菌，其廣泛存在于水源水及各類型包裝飲用水中。近年來，隨著包裝飲用水生產和消費量的不斷上升，銅綠假單胞菌污染包裝飲用水的報道逐漸增多，甚至引起食物中毒?，F階段，包裝飲用水中銅綠假單胞菌污染的問題日益受到重視，包裝飲用水中的銅綠假單胞菌已經成為各級監管部門和檢測機構重點監測的對象。包裝飲用水新國標GB19298-2014于2015年5月24號正式實施，新國標修改了微生物指標與限量，銅綠假單胞菌被列為必檢的微生物檢測項目之一。為了掌握新國標實施以來貴州省內生產和銷售的包裝飲用水中銅綠假單胞菌污染的情況，本文共檢測了291個批次的包裝飲用水，結果分析如下。

　　材料與方法(一)樣品來源 包裝飲用水新國標GB19298-2014于2015年5月24日開始實施，所以此次檢測和統計的水樣為2015年5月24日至2015年12月31日抽檢的樣品。檢測樣品由專業抽樣人員在貴州省內各包裝飲用水生產企業和供水站進行隨機抽樣，共抽取了291個批次的包裝飲用水。各個批次的包裝飲用水均在有效期內進行檢測。(二)試劑與儀器CN瓊脂(貨號：027254)、金氏B培養基(貨號：027052)購自廣東環凱微生物科技有限公司。乙酰胺肉湯(貨號：HB8653)、納氏試劑(貨號：HB8654)、氧化酶試紙(貨號：HB2100)購自青島海博生物技術有限公司。0.45μm濾膜(貨號：HAWG047S6)和過濾儀器購自密理博中國有限公司。三用紫外分析儀購自上海漢諾儀器有限公司。(三)檢測方法及評價嚴格按照國標GB/T8538 4.54-2008進行銅綠假單胞菌的檢測。采用濾膜法進行銅綠假單胞菌的檢測，將250ml水樣用0.45μm孔徑的濾膜進行過濾，然后將濾膜移至CN瓊脂平板上，于36℃±1℃恒溫培養箱中培養40-48h。在培養20-24h和40-48h后觀察濾膜上菌落的生長情況：①濾膜上所有顯綠色或藍色的菌落，直接判定為銅綠假單胞菌并計數;②在長波紫外燈(365nm)下檢查濾膜，能夠產生熒光的非綠/藍菌落為疑似銅綠假單胞菌，進行乙酰胺肉湯產胺試驗，產胺試驗實驗陽性判定為銅綠假單胞菌;③濾膜上不發熒光的紅褐色菌落進行乙酰胺肉湯產胺試驗、氧化酶實驗、金氏B產熒光實驗，如上述三項實驗均為陽性，則判定為銅綠假單胞菌[7]。實驗過程中使用銅綠假單胞菌陽性標準菌株(CMCC:10104)作為對照。檢測結果按照GB19298、DBS52/008等相關標準進行衛生學評價。

　　結果(一)不同類型包裝飲用水中銅綠假單胞菌檢出情況本次共檢測291個批次的包裝飲用水，檢出銅綠假單胞菌陽性樣品9個批次，檢出率為3.09%，檢出范圍為2-51 CFU/250ml。天熱飲用山泉水為215個批次，檢出銅綠假單胞菌陽性樣品7個批次，檢出率為3.24%，檢出范圍為2-51 CFU/250ml。飲用純凈水為75個批次，檢出銅綠假單胞菌陽性樣品2個批次，檢出率為2.67%，檢出范圍為4-32 CFU/250ml。天然飲用山泉水與飲用純凈水銅綠假單胞菌檢出率無顯著性差異(χ2=0.02，P>0.05)(見表1)。

　　表1 不同類型包裝飲用水中銅綠假單胞菌檢出情況

　　樣品

　　批次 銅綠假單胞菌指標 檢出率 檢出范圍

　　合格 不合格 (%) (CFU/250ml)

　　天然飲用

　　山泉水 216 209 7 3.24 2-51

　　飲用純凈水 75 73 2 2.67 4-32

　　合計 291 282 9 3.09 2-51

　　(二)不同包裝類型飲用水中銅綠假單胞菌檢出情況

　　瓶裝飲用水共26個批次，未檢出銅綠假單胞菌陽性樣品。桶裝飲用水共265個批次，檢出銅綠假單胞菌陽性樣品9個批次，檢出率為3.40%，檢出范圍為2-51 CFU/250ml。瓶裝飲用水與桶裝飲用水銅綠假單胞菌檢出率無顯著性差異(χ2=0.91，P>0.05)(見表2)。

　　表2 不同包裝類型飲用水中銅綠假單胞菌檢出情況

　　樣品

　　批次 銅綠假單胞菌指標 檢出率 檢出范圍

　　合格 不合格 (%) (CFU/250ml)

　　瓶裝飲用水 26 26 0 0.00 0

　　桶裝飲用水 265 256 9 3.40 2-51

　　合計 291 282 9 3.09 2-51

　　包裝飲用水是密封于符合食品安全標準和相關規定的包裝容器中,可供直接飲用的水[6]。本文共檢測了291個批次的包裝飲用水，檢出銅綠假單胞菌陽性樣品9個批次，檢出率為3.09%，說明目前貴州省內生產和銷售的包裝飲用水存在銅綠假單胞菌污染問題，應引起市場監管、食品藥品監督管理局等相關部門的重視。

　　本次檢測中銅綠假單胞菌檢出率為3.09%，低于其他地區的檢出率。王燕梅等的調查報告中顯示在江蘇省7個省轄市中，銅綠假單胞菌的檢出率為10.3%(34/331)。陳松等的文章中顯示四川達州市銅綠假單胞菌的檢出率為52.17%(12/23)[。魏磊等的抽樣檢測結果顯示山泉水成品水中銅綠假單胞菌的檢出率為5.6%。

　　本次檢測結果顯示貴州省內生產和銷售的包裝飲用水存在銅綠假單胞菌污染問題。從以往的研究結果來看，銅綠假單胞菌污染包裝飲用水的主要原因有：一是生產用水源被銅綠假單胞菌污染，魏磊、鄧梅清等的調查顯示生產用水源水的銅綠假單胞菌檢出率顯著高于成品水的檢出率;二是水處理和灌裝過程中引起的銅綠假單胞菌污染，不科學的水處理方式、反沖洗操作不當、未徹底消毒的生產環境和生產設備等都有可能引起銅綠假單胞菌對成品水的污染;三是包裝材料的選擇與清洗消毒不當會引起銅綠假單胞菌的污染。

　　隨著經濟與社會的發展，包裝飲用水的消費量逐年增長，為了保障包裝飲用水的衛生質量，降低包裝飲用水銅綠假單胞菌污染風險，保護消費者的切身利益，生產企業應對水源進行科學的保護和管理，選擇科學的水處理方式，科學合理地對生產環境、生產設備、包裝材料進行清洗消毒;監管部門應加強對生產企業的監督和抽查力度，督促包裝飲用水生產企業嚴格按照國家標準進行生產、運輸和貯存，切實保障包裝飲用水的質量和衛生安全。

　　第一作者及通訊作者：

　　姓名：羅紹楠 男，布依族，碩士研究生，貴州省產品質量監督檢驗院工作，助理工程師，研究方向：食品微生物檢測。

　　其他作者：戴奕杰、劉廷菊、肖莉：工作單位：貴州省產品質量監督檢驗院。