糖發酵管

　　成分：牛肉膏 5g、蛋白胨 10g、氯化鈉 3g、磷酸氫二鈉 2g、0.2%滇麝香草酚藍溶液 12mL、蒸餾水 1000mL

　　PH 7.4

　　制法

　　1. 葡萄糖發酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內，121℃高壓滅菌15min。

　　2. 其他各種糖發酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶1000 mL，121℃高壓滅菌15min。另將各種糖類分別配好10%溶液，同時高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100 mL培養基內，以無菌操作分裝小試管。

　　注：蔗糖不純，加熱后會自行水解者，應采用過濾法除菌。

　　試驗方法：從瓊脂斜面上挑取小量培養物接種，于36℃±1℃培養，一般觀察2～3d。遲緩反應需觀察14~30d。

　　乳糖膽鹽發酵管

　　成分：蛋白胨 20g、豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g、乳糖 10g、0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL蒸餾水 1000mL

　　制法：將蛋白胨，膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管10 mL，并放入一個小倒管，115℃高壓滅菌15min。

　　注：雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。

　　5%乳糖發酵管

　　成分：蛋白胨 0.2g、氯化鈉 0.5g、乳糖 5g、2%溴麝香草酚藍水溶液 1.2mL、蒸餾水 100mL

　　pH 7.4

　　制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50mL蒸餾水內，校正pH。將乳糖溶解于另外50mL蒸餾水內，分別滅菌121 ℃ 15min，將兩液混合，以無菌操作分裝于滅菌小試管內。

　　注：在此培養基內，大部分乳糖遲緩發酵的細菌可于ld內發酵。

　　緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗用)

　　成分：磷酸氫二鉀 5g、多胨 7g、葡萄糖 5g、蒸餾水 1000mL

　　制法：溶化后校正pH，分裝試管，每管1mL ，121℃高壓滅菌15min。

　　甲基紅(MR)試驗：自瓊脂斜面挑取少量培養物接種本培養基中，于36±1℃培養2～5d，哈夫尼亞菌則應在22～25℃培養。滴加甲基紅試劑一滴，立即觀察結果。鮮紅色為陽性，黃色為陰性，甲基紅試劑配法：10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中，然后加入20 mL蒸餾水。

　　V-P試驗：用瓊脂培養物接種本培養基中，于36±1℃培養2～4d。哈夫尼亞菌則應在22～25℃培養。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL充分振搖試管，觀察結果陽性反應立刻或于數分鐘內出現紅色，如為陰性，應放在36±1℃下培養4h再進行觀察。

　　營養明膠

　　成分：蛋白胨 5g、牛肉膏 3g、明膠 120g、蒸餾水 1000mL

　　pH 6.8~7.0

　　制法：加熱溶解，校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121℃高壓滅菌10min，取出后迅速冷卻，使其凝固，復查最終pH應為6.8～7.0。

　　試驗方法：用瓊脂培養物穿刺接種，放在22～25℃培養，每天觀察結果，記錄液化時間?；蚍旁?6士1℃培養，每天取出，放冰箱內30min后再觀察結果。

　　苯丙氨酸培養基

　　成分：酵母浸膏 3g、DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g)2g、磷酸氫二鈉 1g、氯化鈉 5g、瓊脂 12g、蒸餾水 1000mL

　　制法：加熱溶解后分裝試管，121℃高壓滅菌15min，使成斜面。

　　試驗方法：自瓊脂斜面上挑取大量培養物，移種于苯丙氨酸瓊脂，在36士1℃培養4h或18～24h，滴加10%三氯化鐵溶液2～3滴，自斜面培養物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。

　　蛋白胨水(靛基質試驗用)

　　成分：蛋白胨(或胰蛋白胨)20g、氯化鈉 5g、蒸餾水 1000mL

　　pH7.4

　　制法：按上述成分配制，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。

　　靛基質試劑

　　柯凡克試劑：將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后緩慢加入濃鹽酸25ml。

　　歐-波試劑：將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內，然后緩慢加入濃鹽酸20 ml。試驗方法：挑取小量培養物接種，在36士1℃培養1～2d，必要時可培養4～5d。加入柯凡克試劑約0.5mL，輕搖試管，陽性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5 mL，沿管壁流下，覆蓋于培養液表面，陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。

　　注：蛋白胨中應含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買來后，應先用已知菌種鑒定后方可使用。

　　硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗用)

　　成分：牛肉膏 3g、酵母浸膏 3g、蛋白胨 10g、硫酸亞鐵 0.2g、硫代硫酸鈉 0.3g、氯化鈉 5g、瓊脂 12g、蒸餾水 1000 mL

　　制法：加熱溶解，校正pH，分裝試管，115℃高壓滅菌15min，取出直立候其凝固。

　　試驗方法：挑取瓊脂培養物，沿管壁穿刺，于36士1℃培養1～2d，觀察結果。產硫化氫者使培養基變為黑色。

　　注：腸桿菌科細菌測定硫化氫的產生，應采用三糖鐵瓊脂或本培養基。

　　尿素瓊脂

　　成分：蛋白胨 1g、氯化鈉5g葡萄糖1g、磷酸二氫鉀 2g、4%酚紅溶液 3 mL、瓊脂 20g、蒸餾水 1000 mL、20%尿素溶液 100mL

　　制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷至50～55℃，加入經除菌過濾的尿素溶液，尿素的最終濃度為2%，最終pH應為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內，放成斜面備用。

　　試驗方法：挑取瓊脂培養物接種，在36士1℃培養24h，觀察結果。尿素酶陽性者由于產堿而使培養基變為紅色。

　　氰化鉀(KCN)培養基

　　成分：蛋白胨10g、氯化鈉 5g、磷酸二氫鉀 0.225g、磷酸氫二鈉 5.64g、蒸餾水 1000 mL、0.5%氰化鉀溶液 20 mL

　　pH 7.6

　　制法：將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內使其充分冷卻。每100 mL培養基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(最后濃度為1：10000)，分裝于12mm*100mm滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4℃冰箱內，至少可保存兩個月。同時，將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基，分裝試管備用。

　　營養瓊脂

　　成分：、蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g、瓊脂15～20g、蒸餾水1000mL

　　制法：將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正pH至7.2~7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。

　　注：此培養基可供一般細菌培養之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計數，瓊脂量為1.5%;如作成平板或斜面，則應為2%。

　　營養肉湯

　　成分：蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯化鈉 5g、蒸餾水 1000mL

　　pH7.4

　　制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225 mL ，121℃高壓滅菌15min。

　　緩沖蛋白胨水(BP)

　　成分：蛋白胨 10g、氯化鈉 5g、磷酸氫二鈉 9g、磷酸二氫鉀 1.5g、蒸餾水1000mL

　　pH 7.2

　　制法：按上述成分配好后以大燒瓶裝，121℃高壓滅菌15min。臨用時無菌分裝每瓶225mL。

　　注：本培養基供沙門氏菌前增菌用。

　　EC肉湯

　　成分：胰蛋白胨 20g、3號膽鹽(或混合膽鹽)1.5g、乳糖 5g、磷酸氫二鉀 4g、磷酸二氫鉀 1.5g、氯化鈉 5g、蒸餾水 1000mL

　　制法：將上述成分混合，溶解后，分裝有發酵倒管的試管中，121℃高壓滅菌15min。最終pH為6.9±0.2。

　　四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)

　　基礎培養基：多胨或眎胨 5g、膽鹽 1g、碳酸鈣 10g、硫代硫酸鈉 3g、蒸餾水 1000mL

　　碘溶液：碘 6g、碘化鉀 5g、蒸餾水 20 mL

　　制法：將基礎培養基的各成分加入蒸餾水中，加熱溶解，分裝每瓶100mL。分裝時應隨時振搖，使其中的碳酸鈣混勻，121℃高壓滅菌15min備用。臨用時每100mL基礎培養基中加入碘溶液2mL，,0.1%煌綠溶液1mL。

　　亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)

　　成分：蛋白胨 5g、乳糖 4g、亞硒酸氫鈉 4g、磷酸氫二鈉 5.5g、磷酸二氫鉀 4.5g、L-胱氨酸 0.01g、蒸餾水 1000mL

　　1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法：稱取L-胱氨酸0.1g或(DL-胱氨酸0.2g)，加1mol/L氫氧化鈉1.5mL，使溶解，再加入蒸餾水8.5mL即成。

　　制法：將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中，加熱煮沸，候冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中，加熱煮沸，候冷，以無菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL。

　　分裝于滅菌瓶中.每瓶100mL，pH應為7.0±0.1。

　　硫酸鉍瓊脂(BS)

　　成分：蛋白胨 10g、牛肉膏 5g、葡萄糖 5g、硫酸亞鐵 0.3g、磷酸氫二鈉 4g、煌綠 0.025g、檸檬酸鉍銨 2g、亞硫酸鈉 6g、瓊脂 18~20g、蒸餾水 1000mL

　　pH 7.5

　　制法：

　　1.將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中。

　　2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。

　　3將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解，冷至80℃。

　　4將以上三液合并，補充蒸餾水至1000mL，校正pH，加0.5%煌綠水溶液5mL，搖勻，冷至50～55℃，傾注平皿。

　　注：此培養基不需高壓滅菌。制備過程不宜過分加熱，以免降低其選擇性。應在臨用前一天制備，貯存于室溫暗處，超過48h不宜使用。

　　三糖鐵瓊脂(TSI)

　　成分：蛋白胨 20g、牛肉膏 5g、乳糖 10g、蔗糖 10g、葡萄糖 1g、氯化鈉 5g、硫酸亞鐵銨 0.2g、硫代硫酸鈉 0.2g、瓊脂 12g、酚紅 0.025g、蒸餾水 1000 mL

　　pH 7.4

　　制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL，搖勻，分裝試管。裝量宜多些，以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面備用。

　　三糖鐵瓊脂換用方法

　　成分：蛋白胨15g、眎胨5g、牛肉膏 3g、酵母膏 3g、乳糖 10g、蔗糖 10g、葡萄糖 1g、氯化鈉 5g、硫酸亞鐵 0.2g、硫代硫酸鈉 0.3g、瓊脂 12g、酚紅 0.025g、蒸餾水 1000 mL

　　pH7.4

　　制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL，搖勻，分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面備用。

　　嗜鹽性試驗培養基

　　成分：蛋白胨2g、氯化鈉 按不同量加、蒸餾水100 mL

　　pH7.7

　　制法：配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100mL。每瓶分別加入不同量的氯化鈉：(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g。待溶解后分裝試管，121℃高壓滅菌15min。