二極管陣列檢測器 在食品檢測中的應用探討
摘要：目的：通過HPLC法對食品添加劑苯甲酸、山梨酸的檢驗，探討二極管陣列檢測器在食品營養學中的應用范圍。方法：采用Agilent C18（150*4.6mm，5µm）色譜柱，用SPD-M20A二極管陣列檢測器檢驗，檢測波長：230nm。以甲醇-乙酸銨溶液（5:95）為流動相，柱溫25.0℃，流速1.00mL/min。結果：疑似峰為苯甲酸峰，且在225nm處有最大吸收。結論：二極管陣列檢測器能夠準確甄別目標峰，在食品檢驗領域具有重要的應用價值。
關鍵詞：食品檢測；二極管陣列檢測器；苯甲酸；甄別
適量的食品添加劑為防腐或者加工工藝所需，并且還能夠賦予食品色、香、味。超量使用食品添加劑會損害消費者的身體機能，合理膳食不但要關注營養組成，更要關注食品中的添加劑是否過量。大多數食品成分復雜，待檢物質為微量甚至痕量，如果在食品前處理過程中處理不當，極易造成分析過程中，雜質成分對待測物質的干擾。本實驗采用HPLC法，運用二極管陣列檢測器對疑似出現的苯甲酸峰進行了確定，對熟肉中可能含有的食品添加劑苯甲酸、山梨酸兩種成分同時進行含量測定。
儀器與試藥
儀器LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津，包括SPD-M20A檢測器，LCSolution工作站）；KT-250W型超聲波清洗器（濟寧科特超聲電子有限責任公司）；AB104-N型電子天平（梅特勒--托尼多儀器(上海)有限公司）；TG16-WS型高速臺式離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）
試藥苯甲酸標準溶液（GBW(E)100006，批號：11003，1.00mg/mL）和山梨酸標準溶液（GBW(E)100007，批號：12001，1.00mg/mL）均購自中國計量科學研究院；甲醇（色譜純）；水（超純水）；其余均為分析純。
方法與結果
色譜條件色譜柱：Agilent C18柱，150*4.6mm，5µm；流動相：甲醇-乙酸銨溶液（5:95）；柱溫：25.0℃；流速：1.00mL/min；檢測波長：230nm。
對照品溶液的制備分別取苯甲酸、山梨酸標準溶液適量，用水將其稀釋成苯甲酸、山梨酸含量分別為0.00mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.08 mg/mL、0.16mg/mL、0.32mg/mL的混合標準使用液。
樣品溶液的制備稱取粉碎均勻樣品（鹵豬耳，本地餐館）于小燒杯中，用20mL水分數次清洗小燒杯，將樣品移入25mL容量瓶中，超聲振蕩提取10min，取出后加2mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入2mL乙酸鋅溶液，搖勻，用水定容至刻度。移入離心管中，4000r/min離心5min，吸出上清液，用微孔濾膜（0.45µm，水相）過濾，即得。
標準曲線的制作將梯度濃度的標準混合使用液精密進樣10µL，分別以苯甲酸和山梨酸濃度為橫坐標，以響應的峰面積為縱坐標，計算得苯甲酸線性回歸方程:Y=4749431303.52X(R2=1)，山梨酸線性回歸方程:Y=7081586158.65X(R2=1)。范圍內線性關系良好。0.02mg/mL濃度色譜圖見圖1。
圖1 標準品HPLC色譜圖
精密度試驗將0.02mg/mL的混合標準溶液連續進樣5次，每次10µL，測定，結果苯甲酸峰面積相對標準偏差RSD=0.28%，山梨酸峰面積相對標準偏差RSD=0.36%，表明儀器精密度良好。
最低檢出限將0.02mg/mL的混合標準溶液稀釋后測定，在信噪比為3時測得苯甲酸檢出限為2ng。
目標峰的確定分別取供試液及0.02mg/mL的混合標準溶液，進樣10µL，用二極管陣列檢測器進行全波段掃描，掃描結果見圖2。
圖2 混合標準溶液掃描圖譜
樣品的含量測定精密稱取樣品2份，按“2.3”項下方法制備供試液，每份供試液分別進樣2次，進樣10µL,將數據代入相應標準曲線，測定結果見表1，分析圖譜見圖4。
表1 熟肉中苯甲酸、山梨酸的含量測定結果
圖4 供試液HPLC色譜圖
討論
超聲提取時間的優化本實驗對超聲的時間進行了優選，試驗中對樣品超聲處理5、10、15分鐘的提取效果進行了考察，結果超聲5分鐘提取不完全，而超聲10分鐘和15分鐘結果相差不大，因此在樣品前處理過程中，超聲處理10分鐘最佳。
目標物質的甄別食品檢驗過程中，在定位峰的保留時間附近，經常會出現其它的峰，難以判定究竟是雜質峰還是待測物質峰。試驗中通過標準溶液定位可知苯甲酸保留時間5.527min，而供試品溶液在5.573min有峰出現，鑒于保留時間有細微差別，難以通過HPLC色譜圖確定待測物質是否存在。本試驗運用二極管陣列檢測器的全波段掃描功能，在180nm至800nm范圍內，分別對標準溶液5.527min出峰物質和供試品溶液5.573min出峰物質進行掃描，結果顯示兩者在波段范圍內吸收趨勢一致，并且均在225nm處有最大吸收，表明兩者同為苯甲酸。
檢測波長的選擇國家標準（食品衛生檢驗方法理化部分㈠）推薦苯甲酸的檢測波長為230nm。通過二極管陣列全波段掃描發現，苯甲酸在225nm處有最大吸收，食品檢驗過程中，是否應該根據實際情況選擇最佳吸收波長進行檢測，尚需更深入的研究。
參考文獻
?。?］中華人民共和國國家標準食品衛生檢驗方法理化部分㈠［S］.2012年版.253-254
呂文超李佳文
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