食品中真菌毒素的儀器分析技術研究
食品中真菌毒素的儀器分析技術研究
真菌及其毒素是導致食品污染的主要物質，消費者在食用、吸入后很容易中毒，很小的量即能夠導致明顯健康損害，甚至出現人身死亡事故，因此食品中真菌毒素對人體健康有著嚴重的威脅，其檢測與分析技術已經成為食品安全領域研究的重點。目前檢測中主要有化學分析法、免疫分析法、儀器分析法等，各種分析法各有優劣。為更好、更精確地分析食品中的真菌毒素，本文對三種常見分析法進行對比研究，并提出儀器分析法在食品真菌毒素檢測中的具體應用策略。
真菌毒素（Mycotoxin）種類多、分布廣，目前已經發現有400多種真菌毒素，大部分都具有毒性，且具有致癌、致畸作用，在農作物種植、收獲、存儲和食品生產等環節污染食品或者進入食物鏈，對人體健康造成嚴重傷害。全球范圍內的真菌毒素污染事件時有發生，例如根據相關資料統計顯示，全球每年有大約20%的糧食作物因為受到真菌毒素污染而失去食用價值。在食品加工過程中雖然能夠去除部分真菌毒素，但并不能徹底消除。所以有效檢測并強化監管，才是消除真菌毒素危害的科學方法。在食品真菌毒素檢測中，常用方法較多甚至說是五花八門，每種檢測方法都各具特點，能夠針對不同毒素進行檢測。
食品中真菌毒素常見分析法
由于真菌毒素容易對各種初級食品、加工后食品、副食產品造成污染，所以為確保消費者健康，對食品中的真菌毒素進行檢測就顯得尤為重要。目前檢測食品中真菌毒素的方法比較多，經常使用的有化學分析法、免疫分析法、生物鑒定法、儀器分析法等，下面對這幾種檢測方式特點與應用效果進行分析。
首先是化學分析法，該方式是最早應用至真菌毒素檢測的方法之一，其特點是對檢測設備要求不高，因此在食品真菌毒素檢測中成本低，而且更為實用，經常被用作大樣本的真菌毒素篩查中，尤其適用于具有熒光特性的真菌毒素。但是該方法的缺點是檢測中需要對樣本進行預處理，因此檢測過程較為復雜，工作量大。另外由于化學分析法應用過程中需要直接接觸樣本，會對檢測精確性造成一定影響，所以近年來化學分析法的應用越來越少。
其次是免疫分析法，主要是借助抗原抗體的特異性反應，以特異性抗體作為分析試劑。因此在本質上，免疫分析法是一種獨特形式的試劑分析法。該方法靈敏度高、特異性好，因此在食品安全檢測、空氣中有害有毒物質檢測較為常用。例如在熒光免疫法檢測中，即是通過熒光信號對結果進行測定，相對于傳統的吸光度檢測，熒光免疫法能夠更好地滿足食品中微量真菌毒素檢測，靈敏度更高。
第三種常見檢測方法為儀器分析法，主要是指借助復雜的檢測設備對食品樣本中的靶向物質進行檢測。在儀器分析法中常用的有高效液相色譜法、超高效液相色譜法、液相色譜和質譜聯用法等等。例如采用高效液相色譜法檢測食品中真菌毒素時，即是利用高效液相色譜儀。而液相與質譜法聯用技術用于食品真菌毒素檢測時靈敏度更高，且能夠對同一樣本中的多種真菌毒素同時進行檢測。另外，隨著技術的發展，儀器分析法檢測越來越自動化，精準度也更高，是目前食品真菌毒素檢測中研究的熱點。
儀器分析技術在食品中
真菌毒素檢測中的應用
食品毒素檢測的儀器分析技術又可以分為多種，每種都具有獨特的適用性。例如氣相色譜法、高效液相色譜法以及色譜質譜聯用技術等。本文研究中著重對常用的高效液相色譜法（HPLC）進行分析，該方法靈敏度高、結果穩定可靠，具體如下。
實驗材料準備
試劑與耗材，實驗試劑與實驗耗材如下表1所示。
標準儲備液的配制：用乙腈分別將玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素B1標準樣品稀釋至1.0μg/mL作為儲備液，保存于4℃冰箱。分別選取200μL混合液，在進行衍生化處理后經高效液相色譜儀分離，熒光檢測儀檢測。
操作步驟
選取一定體積儲備液，臨用前使用甲醇—水（50:50，）溶液稀釋成為適量濃度的混合工作液。然后將食品樣本在粉碎后經過0.5mm篩選，然后稱取5.0g并加入適量玉米赤霉烯酮、B1標準溶液，避光、密封擱置一夜。次日提取檢測。色譜條件：黃曲霉毒素色譜柱為 Agilent ZORBAX C18(150mm*4.6mm, 5μm)；進樣量：25μL；流速：0.5mL/min；流動相：乙腈/水=25/75；熒光檢測器：激發波長：360nm，發射波長：440nm。色譜柱為Agilent ZORBAX C18(150mm*4.6mm,5μm)；進樣量：20uL；流速：1mL/min；流動相：乙腈/水=45/55；柱溫 35℃；熒光檢測器：激發波長：235nm，發射波長：460nm。
結果分析
檢測數據采用Excel軟件計算兩種真菌毒素的最大值、最小值、檢出率等，隨后采用SPSS 16.0進行數據處理，數據以（）表示，判定規則依據 GB2761-2011。結果顯示：黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮的色譜峰的保留時間分別為9.113min、13.920min，二者峰形良好，均與干擾峰分開，可以采用。實驗結果表明，在食品真菌毒素檢測中采用儀器分析法具有較高的精確度與靈敏度，實驗樣品前處理方法簡易，從提取、凈化到色譜分離、結果計算的效率都得以提升，能夠滿足對樣品快速、高通量的檢測要求及糧食安全限量的要求。
結語
在食品生產中真菌毒素對食品污染尤其嚴重，成為食品安全的主要威脅。在檢測中使用儀器分析法樣品用量少，檢測靈敏度高，成為最常用的真菌毒素檢測方法之一。儀器分析法應用于真菌毒素檢測中，一般需要對樣品進行提取、凈化等預處理，然后通過峰的面積大小對樣品毒素進行檢測分析，但是由于真菌毒素對熱不穩定，因此在一定程度上也制約了儀器分析法的使用。所以實際工作中必須要根據真菌毒素種類，科學選擇儀器檢測方法，提高食品中真菌毒素檢測效率與準確度，確保食品安全與質量的提升。
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孫熠 高翠
山東省濱州市食品藥品檢驗檢測中心
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